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技術(shù)文章 / article
胎牛血清（FBS）知多少
2021-10-11 瀏覽次數(shù)：2336
胎牛血清
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。
胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。胎牛血清是品質(zhì)高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分最少。
胎牛血清要求：
1、性狀、外觀：淺黃色澄清、無(wú)溶血、無(wú)異物稍粘稠液體。
2、蛋白質(zhì)含量：3.5%~5.0%( w/v)
3、血紅蛋白含量：≤ 0.02%( w/v)
4、無(wú)菌檢驗(yàn)：陰性
5、支原體檢驗(yàn)：陰性
6、細(xì)菌內(nèi)毒素：≤5(EU/ml)
7、牛腹瀉病毒：陰性
8、大腸桿菌噬菌體：陰性
9、支持細(xì)胞增殖：(Sp2/0-Ag14) 生長(zhǎng)曲線 (接種濃度)最大增殖濃度 ≥2.5×106個(gè)/ml，細(xì)胞倍增時(shí)間：≤15h，克隆率：≥85%
胎牛血清功能
牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)成份，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。
1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。
2. 提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。
4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。
5.起酸堿度緩沖液作用。
6.提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
胎牛血清的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)
胎牛血清(FBS)是常用的血清添加劑，因?yàn)樗缓L(zhǎng)因子、蛋白和大分子。盡管無(wú)血清和非動(dòng)物來(lái)源的培養(yǎng)基也逐漸走紅，但許多細(xì)胞系未必適用，并且存在費(fèi)用較高和生長(zhǎng)較慢等缺點(diǎn)。那么，研究人員在評(píng)估FBS的質(zhì)量時(shí)，需要考慮哪些標(biāo)準(zhǔn)呢？
對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)而言，血清的重要性不言而喻。它含有蛋白、生長(zhǎng)因子、氨基酸、脂類、碳水化合物、維生素及其他組分，可以促進(jìn)貼壁或懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)和維持。胎牛血清(FBS)是常用的血清添加劑，因?yàn)樗缓L(zhǎng)因子、蛋白和大分子。盡管無(wú)血清和非動(dòng)物來(lái)源的培養(yǎng)基也逐漸走紅，但許多細(xì)胞系未必適用，并且存在費(fèi)用較高和生長(zhǎng)較慢等缺點(diǎn)。
目前，市場(chǎng)上存在著不同等級(jí)的FBS。由于FBS關(guān)乎細(xì)胞活力和實(shí)驗(yàn)重復(fù)性等重要的參數(shù)，故在質(zhì)量方面是絕對(duì)不能含糊的。若質(zhì)量不穩(wěn)定，則有可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。那么，研究人員在評(píng)估FBS的質(zhì)量時(shí)，需要考慮哪些標(biāo)準(zhǔn)呢？
1.可追溯性
對(duì)于科學(xué)家而言，最大的風(fēng)險(xiǎn)也許是FBS的純度大打折扣，這可能導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的效果不佳。許多FBS的賣家與多個(gè)產(chǎn)地簽訂短期供應(yīng)協(xié)議來(lái)采集原材料，以便降低成本。他們將這些產(chǎn)品混合，稀釋不同來(lái)源的影響。然而，最終結(jié)果就是質(zhì)量不穩(wěn)定，產(chǎn)品供應(yīng)和價(jià)格出現(xiàn)波動(dòng)。
針對(duì)這一問(wèn)題，國(guó)際血清行業(yè)協(xié)會(huì)(ISIA)實(shí)施了供應(yīng)鏈可追溯性的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，這對(duì)確保FBS各個(gè)批次的質(zhì)量、安全性和重復(fù)性起了關(guān)鍵作用。一些公司提供化學(xué)分析，說(shuō)明原產(chǎn)國(guó)的統(tǒng)計(jì)概率。也許好的方法是追溯到動(dòng)物，以確保產(chǎn)品的來(lái)源。
FBS的供應(yīng)商是否在整個(gè)供應(yīng)鏈中都保留原產(chǎn)地的可追溯記錄？他們是否持有文件，支持各個(gè)階段的處理、運(yùn)輸和商業(yè)交易？他們能否展示*來(lái)源的可追溯性，以確保重復(fù)性和低病毒風(fēng)險(xiǎn)？在考慮購(gòu)買FBS時(shí)，這都是你需要考慮的問(wèn)題。
地域性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估(GBR)是定性評(píng)估一個(gè)國(guó)家或地區(qū)的動(dòng)物感染疾病(如瘋牛病)的可能性。這種方法依賴世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)的監(jiān)控系統(tǒng)，將每個(gè)國(guó)家或地區(qū)的瘋牛病風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行分類。OIE評(píng)估各個(gè)國(guó)家的獸醫(yī)服務(wù)、疾病診斷能力、覺(jué)察癥狀能力及其他因素，以避免瘋牛病的傳播。
新西蘭和澳大利亞都獲得了GBR 1級(jí)，這意味著它們目前是沒(méi)有瘋牛病和口蹄疫的。這兩個(gè)國(guó)家都是出了名的病毒風(fēng)險(xiǎn)低的國(guó)家。由于環(huán)境受到保護(hù)，以及嚴(yán)格的農(nóng)業(yè)法規(guī)和入境要求，再加上它們都是島國(guó)，動(dòng)物們不太可能受到其他地區(qū)疾病的影響。這對(duì)于那些敏感的細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)而言特別有用。對(duì)科學(xué)家來(lái)說(shuō)，好處是花在重復(fù)實(shí)驗(yàn)或檢驗(yàn)新批次上的時(shí)間將大大減少。
2.質(zhì)量
對(duì)血清而言，產(chǎn)品質(zhì)量尤為關(guān)鍵。由美國(guó)食品和藥品管理局(FDA)執(zhí)行的cGMP規(guī)范建立了完整體系，以確保制造過(guò)程和工廠的正確設(shè)計(jì)、監(jiān)控和控制。在購(gòu)買血清時(shí)，你最好選擇遵從cGMP規(guī)范的供應(yīng)商，以便降低產(chǎn)品混合和標(biāo)簽錯(cuò)誤的風(fēng)險(xiǎn)。
確保各批次一致性還涉及其他因素，包括牛群環(huán)境、食物來(lái)源以及質(zhì)量控制檢測(cè)程序。正確采集血清，才能保證它天然的促進(jìn)生長(zhǎng)特性，并實(shí)現(xiàn)FBS產(chǎn)品的出色表現(xiàn)。當(dāng)然，這些資料收集起來(lái)可不容易，那么你可以依靠國(guó)際機(jī)構(gòu)(如FDA、USDA、AQIS等行業(yè)協(xié)會(huì))的認(rèn)證，來(lái)尋找理想的供應(yīng)商。
3.價(jià)格
有時(shí)，F(xiàn)BS的價(jià)格會(huì)大幅波動(dòng)，這取決于許多因素。作為肉類行業(yè)的副產(chǎn)品，F(xiàn)BS的生產(chǎn)在本質(zhì)上會(huì)受到天氣和食物供應(yīng)、經(jīng)濟(jì)條件和牛群規(guī)模等各種因素的影響。如果病毒不定期再來(lái)?yè)v亂一下，那么牛的數(shù)量必然下降，F(xiàn)BS的供應(yīng)也勢(shì)必減少。此外，由于干旱導(dǎo)致奶牛飼養(yǎng)費(fèi)用較高，農(nóng)民可能會(huì)將牛賣掉或屠宰，導(dǎo)致牛群數(shù)量下降。
值得一提的是，世界對(duì)FBS的需求還在不斷增加。每年，全球大約生產(chǎn)600,000 L的FBS，其中cGMP等級(jí)的不足200,000 L，而后者正是大多數(shù)工業(yè)生產(chǎn)公司的要求。隨著大型制藥公司的需求上升，F(xiàn)BS的價(jià)格也在持續(xù)上漲。此時(shí)，找到一家可以提供同批次FBS的供應(yīng)商是十分必要的，這既確保了產(chǎn)品供應(yīng)，也在一定程度上避免價(jià)格波動(dòng)。
4.檢測(cè)
定期的產(chǎn)品檢測(cè)當(dāng)然也不能少。大家應(yīng)注意產(chǎn)品的供應(yīng)商是否定期進(jìn)行生化、激素、病毒和功能方面的檢測(cè)，包括檢測(cè)細(xì)菌、病毒及其他微生物是否存在，以確保產(chǎn)品經(jīng)過(guò)全面鑒定。質(zhì)量控制檢測(cè)也應(yīng)當(dāng)開展，以確保血清產(chǎn)品始終符合規(guī)定并合乎規(guī)格。
總的來(lái)說(shuō)，F(xiàn)BS及其他血清有可能大大影響細(xì)胞培養(yǎng)工作的質(zhì)量和重復(fù)性。因此，在購(gòu)買過(guò)程中，我們有必要對(duì)FBS的身世、質(zhì)量以及質(zhì)檢過(guò)程做到心中有數(shù)，而不僅僅被價(jià)格所左右，這樣才能改善實(shí)驗(yàn)結(jié)果，節(jié)省寶貴時(shí)間
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